小分子抗原檢測科普

        半抗原(hapten)，又稱不完全抗原(incomplete antigen)，是指某些單獨存在時不能誘導免疫應答，即不具備免疫原性，但當與大分子蛋白質或非抗原性的多聚賴氨酸等載體交聯或結合(通常是以共價鍵的形式進行結合)后可獲得免疫原性，從而誘導免疫應答的小分子物質。半抗原與蛋白質載體或高分子聚合物結合后才有免疫原性，因此它是只有免疫反應性(抗原性)。小分子化合物抗原是最典型的半抗原，常見的半抗原有多糖、類脂、核酸和某些小分子化合物和藥物等。

小分子抗原制備:

        要制備小分子半抗原的抗體，對小分子的結構有一定的要求，需要一定的復雜性或剛性，如含有苯環、雜環基團或者有分支結構，否則難以產生抗體或產生的抗體效價也較低。

        一些小分子半抗原若具有活性基團，如-COOH、-NH2、-OH等，可以跟載體蛋白進行偶聯，制備完全的人工抗原。如果半抗原沒有可直接與載體共價連接的基團，或雖有活性基團但這些基團對維系半抗原的免疫特性和特征結構十分重要，或直接與載體蛋白連接后半抗原的特征結構易受載體的局部微化學環境或空間位阻的干擾影響機體的免疫反應，則必須要對半抗原小分子重新設計，合成修飾化的半抗原。

小分子抗原結構修飾的常見方法：

1．琥珀酸酐法將分子結構中帶有羥基的化合物反應修飾成帶羧基；

2．羧甲基羥胺法或對氨基苯甲酸法將羰基類的化合物修飾為羥基；

3．一氯醋酸鈉法或者重氮化法（酸性條件與亞硝酸鈉反應），酚羥基類化合物被修飾為羧基；

4．Mannish法將胺類的化合物修飾成氨基類化合物。

常見的載體:

1.鑰孔血藍蛋白(KLH)

        鑰孔血藍蛋白是一種存在于節肢動物和軟體動物中的含銅蛋白質，分子量在4.5×105~1.3×107Da范圍內。KLH具有較高的免疫原性，是最常用的載體，也是用于哺乳動物宿主（如兔和小鼠）的理想載體。然而，KLH在水中的溶解度較差，呈絮狀，但這不影響KLH的免疫原性。

2.牛血清白蛋白(BSA)

        牛血清白蛋白是從牛的血漿中提取的一種蛋白，為可得的最穩定、溶解度最高的白蛋白之一。它的分子量為6.7×104Da，其結構中包含有59個賴氨酸。BSA是弱抗原性化合物的常用載體。由于分子量較小而較易溶于水，BSA常用于免疫測定。然而，因為BSA在基于抗體的測定（如ELISA）中常用于封閉非特異性結合位點，所以若使用針對半抗原-BSA復合物的抗體進行測定會產生假陽性。

3.卵清蛋白(OVA)

        卵清蛋白是從雞蛋蛋白中分離出的一種蛋白質，分子量為45×103Da。OVA通常是用作備用的載體，用來確認抗體對半抗原具有特異性而不是對載體。

小分子抗原抗體的應用:

*小分子化合物的快速檢測；

*疾病相關的代謝中間體檢測，監測血藥濃度；

*食品殘留檢測；

*毒品檢測，興奮劑檢測等

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